DWD-1 ανιχνευτής UV (υψηλής απόδοσης διπλό μήκος κύματος διπλών ακτίνων) ενσωματωμένη επεξεργασία δεδομένων

Σειρά μήκους κύματος: 254nm, 280nm (ταυτόχρονη ανίχνευση), και επιλέξτε δύο μήκους κύματος ταυτόχρονα ανάμεσα στις γραμμές φάσματος 254nm, 280nm-400nm.

Χαρακτηριστικά του όργανου DWD-1

Διπλό μήκος κύματος πρωτεΐνης 280nm/254nm:

Τα μόρια πρωτεΐνης περιέχουν αρωματικά αμινοξέα όπως η τυροζίνη και η τραΐνη που συνδέονται με διπλούς δεσμούς. Έχουν την ιδιότητα της απορρόφησης του υπεριώδου φωτός, η κορυφή απορρόφησης του είναι στο μήκος κύματος 280nm, και η τιμή της φωτικής πυκνότητας απορρόφησης στο μήκος κύματος αυτό είναι θετικά αναλογική με τη συγκέντρωσή του, επομένως μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως βάση για την ποιητική και ποσοτική μέτρηση της πρωτεΐνης, γι 'αυτό το λόγο, η μέθοδος απορρόφησης υπεριώδου στο μήκος κύματος 280nm χρησιμοποιείται συνήθως για τη συνεχή παρακολούθηση της συγκέ Ωστόσο, επειδή η περιεκτικότητα σε τυροζίνη και τραζίνη σε διάφορες πρωτεΐνες είναι διαφορετική, για να προσδιοριστεί με ακρίβεια η ποσότητα, είναι απαραίτητο να συγκρίνεται η καθαρή πρωτεΐνη που πρέπει να μετρηθεί ως κριτήριο ή να είναι ήδη γνωστός ο συντελεστής αφαίρεσης φωτός ως αναφορά. Επιπλέον, πολλές μη πρωτεϊνικές ουσίες έχουν επίσης καθορισμένη απορροφητική ικανότητα σε μήκος κύματος 280nm και μπορεί να προκύψουν παρεμβολές. Οι επιπτώσεις αυτών είναι ιδιαίτερα σοβαρές από τα νουρεοξέα (πουρίνες και πυριμιναλίδες). Η απορρόφηση στα 280nm είναι 10 φορές ισχυρότερη (ανά γραμμάριο) από την πρωτεΐνη, αλλά το πυρηνικό οξύ είναι ισχυρότερο στα 254nm με κορυφή απορρόφησης κοντά στα 254nm. Ο συντελεστής αφαίρεσης φωτός στο 254nm είναι διπλάσιος από το 280nm.

Αντίθετα, οι πρωτεΐνες έχουν μια τιμή απορρόφησης υπεριώδους 280nm μεγαλύτερη από την απορρόφηση 254nm.

Συνήθως：

Αναλογία απορρόφησης φωτός καθαρής πρωτεΐνης: A280/A254" 1,8

Αναλογία απορρόφησης φωτός: A280/A254 0,5

Ως εκ τούτου, όταν υπάρχουν ταυτόχρονα πυρηνικά οξέα στο διάλυμα πρωτεΐνης (όπως συμβαίνει με τα περισσότερα βιολογικά συστήματα), πρέπει να μετρηθεί ταυτόχρονα το OD254nm και το OD280nm. Στη συνέχεια, με βάση την αναλογία της απορρόφησης των δύο μήκων κύματος, η πραγματική περιεκτικότητα σε πρωτεΐνες υπολογίζεται με εμπειρική διόρθωση για να εξαλείψει την επίδραση του νουκλεϊκού οξέος.

Συγκέντρωση πρωτεΐνης: 1,45 x A280-0,74 x A254 (mg/ml)

Αυτός ο εμπειρικός τύπος δημιουργήθηκε από μια σειρά δεδομένων που προσδιορίζονται από ένα μείγμα πρωτεΐνης (ελονολαζής μαγιάς) και νοκλεϊκού οξέος (νοκλεϊκού οξέος μαγιάς) σε γνωστές διαφορετικές συγκέντρώσεις.